“方法驗(yàn)證”與“方法確認(rèn)”區(qū)別
CNAS-CL01：2018《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則》將方法證實(shí)的名稱更改為方法驗(yàn)證，下面我們以方法驗(yàn)證來代替方法證實(shí)。 方法確認(rèn)是對非標(biāo)準(zhǔn)方法，實(shí)驗(yàn)室制定的方法，超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法或其它修改的標(biāo)準(zhǔn)方法確認(rèn)能否合理，合法使用的過程。 方法驗(yàn)證是指在標(biāo)準(zhǔn)方法或者非標(biāo)方法在引入實(shí)驗(yàn)室使用前，對實(shí)驗(yàn)室從人、機(jī)、料、法、環(huán)、測等方面評定其是否有能力在滿足方法要求的情況下開展檢測校準(zhǔn)活動(dòng)的過程。 一，對象不同 1.方法確認(rèn)的對象是：非標(biāo)方法，包括部分非標(biāo)準(zhǔn)方法，實(shí)驗(yàn)室制定的方法，超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法，其它修改的標(biāo)準(zhǔn)方法。 2.方法驗(yàn)證的對象是：標(biāo)準(zhǔn)方法和經(jīng)過確認(rèn)的非標(biāo)方法。 二，目的不同 1.方法確認(rèn)的目的是：確認(rèn)該非標(biāo)準(zhǔn)方法能否合理、合法使用。 2. 方法驗(yàn)證的目的是：驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室是否有能力按方法要求開展檢測/校準(zhǔn)活動(dòng)。 3.要了解二者的差別，首先要了解其定義。 方法驗(yàn)證 英文標(biāo)準(zhǔn)中稱為“verification”，可譯為“證實(shí)”或“驗(yàn)證”。在實(shí)驗(yàn)室工作中，其定義為“提供客觀證據(jù)，證明某項(xiàng)目滿足規(guī)定要求”。 方法確認(rèn) 英文標(biāo)準(zhǔn)中稱為“validation”，可譯為“確認(rèn)”。其定義為“通過提供客觀證據(jù)，對特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求，得到滿足的認(rèn)定。” 二者從定義上很相似，在實(shí)際操作中，驗(yàn)證或確認(rèn)參數(shù)也都需要從檢出限、定量限、靈敏度、選擇性、線性范圍、測量范圍等參數(shù)進(jìn)行評估。 這樣看來，方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)從技術(shù)層面上殊途同歸，但實(shí)際上，二者卻有著本質(zhì)上的區(qū)別。其中最關(guān)鍵的區(qū)別，在于方法確認(rèn)與方法驗(yàn)證的對象是不同的。 方法驗(yàn)證，是針對標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行的。 “17025”中規(guī)定，在引入檢測或校準(zhǔn)之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)證實(shí)能夠正確地運(yùn)用這些標(biāo)準(zhǔn)方法。標(biāo)準(zhǔn)方法是指由公認(rèn)機(jī)構(gòu)經(jīng)過評價(jià)確認(rèn)后向社會(huì)公開發(fā)布的技術(shù)規(guī)范文件。實(shí)驗(yàn)室在使用標(biāo)準(zhǔn)方法之前，應(yīng)經(jīng)過方法驗(yàn)證，或稱之為方法證實(shí)，即實(shí)驗(yàn)室在使用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行檢測前需要證實(shí)實(shí)驗(yàn)室使用標(biāo)準(zhǔn)方法的技術(shù)能力是否達(dá)到了標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定要求。 方法確認(rèn)，主要針對非標(biāo)方法。 其對象在“17025”標(biāo)準(zhǔn)中有所規(guī)定。從廣義的理解來看，除了國際、區(qū)域、國家、行業(yè)、地方標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定方法以外的檢測方法都屬于非標(biāo)準(zhǔn)方法，除了第一類的方法屬于標(biāo)準(zhǔn)方法，其他三類都屬于非標(biāo)準(zhǔn)方法。 當(dāng)實(shí)驗(yàn)室采用的檢測方法為非標(biāo)準(zhǔn)方法時(shí)，就要對非標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行確認(rèn)，針對非標(biāo)準(zhǔn)方法的不同類型，進(jìn)行區(qū)分來加以討論。 01 已獲得政府或認(rèn)可機(jī)構(gòu)承認(rèn)的非標(biāo)準(zhǔn)方法 國家相關(guān)主管或行業(yè)主管部門發(fā)布的技術(shù)方法，此類方法雖不是標(biāo)準(zhǔn)方法，但因其已得到權(quán)威機(jī)構(gòu)承認(rèn)，故可直接使用，不需要再進(jìn)行確認(rèn)，但在投入使用前實(shí)驗(yàn)室需進(jìn)行證實(shí)以確保實(shí)驗(yàn)室具備實(shí)施這些方法的能力。 02 知名技術(shù)組織或有關(guān)科學(xué)書籍和期刊公布的方法 知名技術(shù)組織如國際上普遍采用、行業(yè)廣泛認(rèn)可的某些公司，行業(yè)協(xié)會(huì)，它們的標(biāo)準(zhǔn)除某些特定的行業(yè)需要得到行業(yè)主管部門的承認(rèn)以防與主管部門的規(guī)定不一致外，實(shí)驗(yàn)室也可以直接進(jìn)行能力證實(shí)后使用。 03 設(shè)備制造商制定的方法 實(shí)驗(yàn)室在采用由設(shè)備制造商制定的方法時(shí)，要根據(jù)檢測樣品的類型進(jìn)行判斷，如果試驗(yàn)樣品屬于儀器設(shè)備方法規(guī)定的種類并取值在儀器測量的范圍內(nèi)，則實(shí)驗(yàn)室可直接證實(shí)后使用該方法，否則實(shí)驗(yàn)室同樣要進(jìn)行方法的確認(rèn)，進(jìn)行技術(shù)確認(rèn)并制定成文件。 04 實(shí)驗(yàn)室自己設(shè)計(jì)制定的方法或超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過的標(biāo)準(zhǔn)方法 實(shí)驗(yàn)室自制的方法必須經(jīng)過技術(shù)確認(rèn)，確認(rèn)可以由業(yè)內(nèi)專家進(jìn)行，并提供由權(quán)威技術(shù)機(jī)構(gòu)出具該方法準(zhǔn)確可靠的證明材料。如果實(shí)驗(yàn)室自身為行業(yè)內(nèi)的權(quán)威機(jī)構(gòu)，則可由實(shí)驗(yàn)室自己組織技術(shù)確認(rèn)，必要時(shí)可提供外部證明材料。 方法驗(yàn)證總體原則 在化學(xué)分析實(shí)驗(yàn)室引入標(biāo)準(zhǔn)方法時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)定量分析和定性分析所述，驗(yàn)證操作該方法是否滿足標(biāo)準(zhǔn)的要求，即證實(shí)（注意講的是證實(shí)）該方法能在該實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的設(shè)施設(shè)備、人員、環(huán)境等條件下獲得令人滿意的結(jié)果，必要時(shí)可參加能力驗(yàn)證或進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間比對。 如果只是對標(biāo)準(zhǔn)方法稍加修改（只要改了就要做），如使用不同制造商的同類設(shè)備或試劑等，必要時(shí)也應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證，以證明能夠獲得滿意的結(jié)果，并將其修改內(nèi)容制訂成作業(yè)指導(dǎo)文件。 定量分析方法驗(yàn)證 方法驗(yàn)證過程中關(guān)鍵的參數(shù)應(yīng)取決于方法的特性和可能測到的樣品基質(zhì)的檢測范圍，至少應(yīng)測定正確度和精密度。對于痕量化學(xué)分析實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)確保獲得適當(dāng)?shù)腖OD和LOQ。通常情況下定量分析方法驗(yàn)證的參數(shù)選擇可參考下表。 定性分析定性方法驗(yàn)證 分析的精密度通常表示為假陽性或假陰性率，其可以用不同的濃度水平來確定。 實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行方法驗(yàn)證可分析一組陰性或陽性加強(qiáng)樣品。如對每個(gè)不同的樣品基質(zhì)，兩個(gè)重復(fù)樣品在三個(gè)含量水平上加以分析。 建議的含量水平為空白(無分析物)、低濃度(接近方法的最低適用濃度)和高濃度(接近方法的最高適用濃度)，可用標(biāo)準(zhǔn)加入法得到適當(dāng)?shù)臐舛龋?按照同一個(gè)方法實(shí)施檢測時(shí)，將測試樣品分成兩個(gè)或更多部分。一部分進(jìn)行常規(guī)分析，其他部分在分析前加入已知量的標(biāo)準(zhǔn)分析物。 加入的標(biāo)準(zhǔn)分析物的量應(yīng)是樣品中分析物估計(jì)含量的2倍一5倍，也可以是按照方法定量限、容許限等推算的標(biāo)準(zhǔn)分析物的量。 標(biāo)準(zhǔn)添加法可用于衡量方法回收率，其可能受測定樣品中分析物的含量和基質(zhì)等因素影響，也可用于評估在定量限、容許限等水平上的正確度。假陽性或假陰性率應(yīng)與方法確認(rèn)的數(shù)據(jù)相當(dāng)，才能證明實(shí)驗(yàn)室有能力使用該方法。 通常情況下定性分析方法驗(yàn)證的參數(shù)選擇可參考上表。 實(shí)驗(yàn)室如何做方法驗(yàn)證？ 實(shí)驗(yàn)室方法驗(yàn)證的一般要求： 1、標(biāo)準(zhǔn)編制組應(yīng)編制方法驗(yàn)證方案，根據(jù)影響方法的精密度和準(zhǔn)確度的主要因素和數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求，選擇合適的實(shí)驗(yàn)室、樣品類型、含量水平、分析人員、分析設(shè)備、分析時(shí)間等內(nèi)容。 2、標(biāo)準(zhǔn)編制組除可以使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品外，還應(yīng)提供實(shí)際樣品進(jìn)行方法驗(yàn)證，實(shí)際樣品應(yīng)盡量覆蓋方法標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍。 3、在方法驗(yàn)證前，參加驗(yàn)證的操作人員應(yīng)熟悉和掌握方法原理、操作步驟及流程，必要時(shí)應(yīng)接受培訓(xùn)。 4、方法驗(yàn)證過程中所用的試劑和材料、儀器和設(shè)備及分析步驟應(yīng)符合方法相關(guān)要求。 5、參加驗(yàn)證的操作人員及標(biāo)準(zhǔn)編制組應(yīng)按照要求如實(shí)填寫《方法驗(yàn)證報(bào)告》中的“原始測試數(shù)據(jù)表”，若有必要，應(yīng)附上與該原始測試數(shù)據(jù)表內(nèi)容相符的圖譜或其他由儀器產(chǎn)生的記錄打印條等。 6、標(biāo)準(zhǔn)編制組根據(jù)方法驗(yàn)證數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)、分析、評估結(jié)果，最終形成《方法驗(yàn)證報(bào)告》。 方法確認(rèn)的方法有6種： 1、使用參考標(biāo)準(zhǔn)或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校準(zhǔn)或評估偏倚和精密度。 2、對影響結(jié)果的因素進(jìn)行系統(tǒng)性的評審。 3、通過改變控制參數(shù)檢驗(yàn)方法的穩(wěn)健性，如恒溫箱溫度，加樣體積等。 4、與其它已確認(rèn)的方法進(jìn)行結(jié)果比對。 5、實(shí)驗(yàn)室間比對。 6、根據(jù)對方法原理的理解和抽樣或檢測方法的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)評定結(jié)果的測量結(jié)果不確定度。 方法驗(yàn)證的方法應(yīng)包含以下幾個(gè)方面： 1、對執(zhí)行新方法所需的人力資源的評價(jià)，即檢測/校準(zhǔn)人員是否具備所需的技能及能力，必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行人員培訓(xùn)，經(jīng)考核后上崗。 2、對現(xiàn)有設(shè)備適用性的評價(jià)，是否要補(bǔ)充新的的標(biāo)準(zhǔn)器或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。 3、對物品制備，包括前處理、存放等各環(huán)節(jié)是否滿足新方法要求的評價(jià)。 4、對操作規(guī)范、不確定度，原始記錄、報(bào)告格式及其內(nèi)容是否適應(yīng)新方法要求的評價(jià)。 5、對設(shè)施和環(huán)境條件的評價(jià)，必要時(shí)進(jìn)行驗(yàn)證。 6、對新方法正確運(yùn)用的評價(jià)，當(dāng)有舊方法變更時(shí)，應(yīng)對新舊方法進(jìn)行比較，尤其是差異分析與比對的評價(jià)。 7、按新方法要求進(jìn)行兩次以上完整模擬檢測/校準(zhǔn)，出具兩份完整結(jié)果報(bào)告。 注意： 1. 方法確認(rèn)應(yīng)有文件規(guī)定和相應(yīng)記錄，當(dāng)修改已經(jīng)確認(rèn)過的方法時(shí)，應(yīng)確定這些修改的影響，如果影響到原有的確認(rèn)，應(yīng)重新進(jìn)行確認(rèn)。 2. 方法驗(yàn)證應(yīng)有文件規(guī)定和相應(yīng)記錄，當(dāng)方法變化后，應(yīng)重新進(jìn)行驗(yàn)證。 實(shí)驗(yàn)室方法驗(yàn)證的具體要求 1、檢出限的驗(yàn)證 確定檢出限，按方法操作步驟及流程進(jìn)行分析操作，計(jì)算結(jié)果的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差、檢出限等各項(xiàng)參數(shù)。最終的方法檢出限為各驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室所得數(shù)據(jù)的最高值。 2、精密度的驗(yàn)證 有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品的測定：采用高、中、低 3 種不同含量水平(應(yīng)包括一個(gè)在測定下限附近的濃度或含量)的統(tǒng)一樣品，每個(gè)樣品平行測定 6 次以上，分別計(jì)算不同濃度或含量樣品的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差等各項(xiàng)參數(shù)。 實(shí)際樣品的測定：各驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對 1 ～3 個(gè)含量水平的同類型樣品進(jìn)行分析測試，按每個(gè)樣品平行測定 6 次以上，分別計(jì)算不同樣品的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差等各項(xiàng)參數(shù)。 對各驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差、重復(fù)性限r(nóng)和再現(xiàn)性限R。 3、準(zhǔn)確度的驗(yàn)證 若各驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行分析測定確定準(zhǔn)確度，則需對 1 ～ 3個(gè)不同含量水平的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行測定，按全程序每個(gè)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品平行測定 6 次以上，分別計(jì)算不同濃度或含量水平有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對誤差等各項(xiàng)參數(shù)。 若實(shí)驗(yàn)室對實(shí)際樣品進(jìn)行加標(biāo)分析測定確定準(zhǔn)確度，則需對每個(gè)樣品類型的1 ～ 3 個(gè)不同含量水平的統(tǒng)一樣品中分別加入一定量的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行測定， 每個(gè)加標(biāo)樣品平行測定 6 次以上，分別計(jì)算每個(gè)統(tǒng)一樣品的加標(biāo)回收率。 對各驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算其相對誤差或加標(biāo)回收率的均值及變動(dòng)范圍。
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